瑾萱生物（Gxene Biotech）多年致力于重组蛋白表达与制备研究。我们的科学家拥有丰富的酵母（Yeast）蛋白重组表达、发酵和纯化经验，能够快速为不同客户定制蛋白酵母表达策略。
蛋白酵母表达系统兼具部分原核蛋白表达特征（培养条件简单、生长速度快、表达水平高、操作简便）和部分真核蛋白表达特征（蛋白翻译后能进行正确加工、修饰，合理的空间折叠）。重组蛋白酵母表达系统的优势主要表现在以下几个方面：重组蛋白既可以分泌形式又可以非分泌形式在酵母系统中表达，且能高水平表达，达到5g/L；外源蛋白基因可以以整合的方式插入到酵母染色体上，随染色体复制而不会丢失；酵母具有真核生物的亚细胞结构，具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能，适合活性蛋白表达；容易实现超高密度发酵，瑾萱生物能同时为客户提供多种规格的蛋白酵母发酵规模，如500L发酵罐，配合我们的蛋白纯化平台，能够在较短周期内获得高质量的重组蛋白产品。
蛋白酵母分泌表达步骤与周期
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步骤
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服务内容
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周期
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酵母表达载体亚克隆
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*密码子优化，基因合成(或客户提供质粒模板：目的基因扩增)
*将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上，可提供表达载体，如pPICZaA 、pGAPZaA、pPIC9K
*拼接序列验证：测序
*交付：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序原始报告
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1-2周
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酵母表达菌株转化
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*可提供表达菌株：X33，GS115，酿酒酵母等。
*扩增培养5-10个阳性克隆并进行重组蛋白诱导表达
*SDS-PAGE交付：阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。
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2周
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酵母表达菌株筛选
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*检测重组蛋白表达情况（适用于多拷贝数和高表达菌株）
*交付：阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。
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2周
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酵母表达菌株表达优化
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对挑选出来的单克隆菌株，优化培养及诱导条件（培养基，菌体密度，甲醇浓度，诱导时间等），提高目标蛋白的表达量
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2周
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小规模蛋白表达及纯化
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*1L发酵液通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
*SDS-PAGE交付：重组蛋白0.02-3mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度>85%。
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2-3周
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大规模蛋白表达及纯化
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10L，30L，80L,130L,500L发酵规模
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增值服务
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*通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。
*蛋白质N端测序：PPSQ31（Edman降解法测序仪）
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1-2周
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服务优势
--密码子优化：包含稀有密码子分析，蛋白亲水性分析和跨膜结构域的预测分析
--分泌蛋白表达，接近天然构象的重组蛋白
--多种规模蛋白发酵模式：小规模（500ml、10L）和大规模（80L、130L、250L和500L发酵罐）
--高纯度毫克级，克级重组蛋白；稳定的批间一致性
--低内毒素：LAL检测法<0.1EU/ug
--完整的GMP文件支撑体系，保证实验信息可追溯
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