Biotin偶联试剂盒
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产品编号：GX00001RL |
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包装规格： |
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产品内容 |
包装规格 |
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Biotin-Protein Ligase ( 1mg/ ml) |
700 µl×4 vials |
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10 × Biotin Ligase Buffer A |
10 ml |
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10 × Biotin Ligase Buffer B |
10 ml |
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储存条件： -80℃密闭保存一年有效，低温运输。 |
产品概述
生物素连接酶 (Biotin Ligase 、BirA 、EC 6.3.4.15)能活化生物素形成生物素酰 -5'-腺苷酸，将生物素特异地转 移到生物素受体蛋白（如 AviTag 融合蛋白）上，使蛋白生物素化。
来源
重组蛋白（Escherichia coli）
活性及纯度
Biotin-Protein Ligase 生物活性≥7,500 Units/ μg 纯度＞95% ，无可检测的蛋白酶活性。
酶活性单位定义
底物蛋白（多肽）浓度为 40 µM 的条件下，于 25℃孵育 12-16小时 ，将 1 pmol 蛋白（多肽）生物素化所需 的酶 量定义为一个活性单位。
储存条件
1. 干冰运送，解冻后分装，避免反复冻融；
2. Biotin-Protein Ligase 长期保存置于-80℃ , 短期内使用置于-20℃ , 频繁使用可短时置于4℃ 。在4℃条件下 保存三个月可保持>90% 的酶活性；
3. Ligase Buffer A 、B 储存于-20℃, 可反复冻融。
反应体系示例
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反应物组成 |
体积 |
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10×Biotin Ligase Buffer A |
2.5 µl |
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10×Biotin Ligase Buffer B |
2.5 µl |
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Biotin Ligase |
0.17 µl |
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蛋白（多肽）底物 |
1-5 ug |
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dH2O（灭菌蒸馏水） |
up to 25 μl |
总体积 25 µl ，于 25℃孵育 12-16小时，使底物完全生物素化。
注意事项
1. 本产品的底物为 AviTag 融合蛋白。
2. 如底物蛋白（多肽）需保存在较低温度时，可适当降低反应温度并应延长酶促反应时间。
3. 氯化钠（ >100 mM）、甘油（>5% W/V）、硫酸铵（>50 mM）等许多常见的缓冲液成分会抑制生物素连接酶的活性。当 底物蛋白（多肽）确有必要使用这些试剂时，应尽量降低浓度。
4. 底物中可含有 Tris(pH 8.0) ， 最佳浓度为 10 mM ，不超过 50 mM。
FAQs
Q：如何阻止蛋白酶降解底物？
A：本产品的生物素连接酶经严格质量控制，没有蛋白酶活性。如果用于生物素化的底物蛋白是未经纯化的粗提蛋白，建 议加入适量的蛋白酶抑制剂， 以防止在生物素化的过程中发生降解。
Q：如何确定参与反应的最适本酶量及反应条件？
A： 由于不同蛋白性质差别很大、生物酶反应存在一定的不确定性，说明书中所述反应条件并不完全适用于所有蛋白。建
议用户可以进行预实验：可先取少量蛋白，分成若干份相同量的底物，加入不同稀释度的酶，相应量的 Buffer A、B ，30
℃ 1 h （或其它时间、温度条件）反应，以 SDS-PAGE Loading Buffer 终止反应后，电泳并转移至 NC 膜上进行 Western Blotting 检测（BSA 或脱脂奶粉封闭后直接以市售的 HRP-Streptavidin 孵育，DAB 显色），比较生物素化情况，选取最适 条件。 由于 Streptavidin 与 Biotin 结合力极强，因而用于 Western Blotting 检测时，只需很少生物素化蛋白即可观察结果。
Q：如果我的底物蛋白浓度相当低且不容易浓缩，进行生物素化时该怎么办？
A:在进行相同底物量的酶促反应时加入更多的酶并适当延长反应时间。但有一个问题不容忽视，酶是蛋白质，在酶量增加 的时候，引入体系中的蛋白量亦增加了，如果后续的实验不容许出现很大量杂蛋白，那么延长反应时间将是唯一的选择。
Q：去污剂对于生物素化反应有无影响？
A：经过实验检测，0.2%的 Tween 20 对反应没有任何影响。
该产品仅限于实验科学研究用，若有任何单位或个人将该产品用于临床诊断、治疗等其他国家专门规定的特殊用途，本公司概不 承担任何责任
