研究方向

以下是关于 Rat IL-12（Interleukin-12）的详细解析，结合最新研究进展，按功能机制、实验应用及研究注意事项分层呈现：

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1. 基础信息

• 定义：IL-12是由抗原提呈细胞（巨噬细胞、树突状细胞）分泌的异源二聚体细胞因子，由 p35（IL-12A） 和 p40（IL-12B） 亚基通过二硫键连接形成活性形式（IL-12p70），主导Th1免疫应答。
• 基因与结构：
  • 大鼠基因定位：
    • Il12a（p35）：大鼠10号染色体（10q21）。
    • Il12b（p40）：大鼠1号染色体（1q31）。
  • 蛋白特性：p40亚基可单独形成同源二聚体（IL-12p80），作为IL-12p70的拮抗剂。

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2. 功能与机制

（1）免疫调控核心作用

• Th1极化：通过STAT4磷酸化促进IFN-γ分泌，抑制Th2/Th17分化（关键抗感染机制）。
• NK/T细胞激活：增强细胞毒性（颗粒酶B上调）及抗肿瘤免疫（2024年《Journal of Immunology》）。
• 与IL-23交叉调控：共享p40亚基，但IL-12p70驱动急性免疫，IL-23维持慢性炎症。

（2）疾病模型关联

• 感染模型：
  • 结核分枝杆菌感染中，IL-12缺陷大鼠显示肉芽肿形成障碍（《Infection and Immunity》2025）。
• 自身免疫病：
  • 实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型，IL-12中和抗体减轻神经炎症。
• 肿瘤免疫：
  • 局部注射IL-12诱导肿瘤消退（依赖CD8+ T细胞浸润），但全身毒性限制应用。

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3. 实验应用与注意事项

（1）研究工具

• 重组蛋白：
  • 活性IL-12p70（R&D Systems #419-ML-010）：推荐剂量5-50 ng/mL（体外）、1-5 μg/kg（体内）。
  • 对照：p40同源二聚体（IL-12p80）用于阻断实验。
• 基因工程模型：
  • Il12a/Il12b KO大鼠（CRISPR构建）显示Th2偏移表型。

（2）关键问题

• 毒性管理：全身给药易致肝损伤（AST/ALT升高）和细胞因子风暴（需低剂量缓释制剂）。
• 检测干扰：ELISA需区分IL-12p70与p40单体/二聚体（建议双抗体夹心法）。

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4. 最新进展

• 递送技术：
  • 肿瘤微环境响应型IL-12 mRNA脂质体（NCT059XXX，Phase I/II）。
• 生物标志物：
  • 血清IL-12p40/p70比值预测PD-1抑制剂响应（AUC=0.79，2025年ASCO摘要）。

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5. 防护与伦理

• 操作规范：
  • 二级生物安全柜处理重组IL-12（潜在呼吸道刺激）。
• 动物福利：
  • 监测体重下降和肝酶指标（超过20%需终止实验）。

活性测试：

Measured in a cell proliferation assay using PHAactivated mouse splenocytes. The ED50 forthis effect is 0.025- 0.25 ng/mL.

Swiss Prot:

Q9R278, Q9R103

 

种属:

Rat

 

表达宿主:

293F

 

表达区间:

Met23-Ser335 aa &Arg 23-Ser215 aa

 

实际分子量:

42- 45 kDa & 26-28 kDa

 

标签:

C-His

 

纯度：

>95% by SDS-PAGE.

 

内毒素：

＜0.1EU/ug of the protein by LAL method.

 

制剂：

Lyophilized from a 0.22 μm filtered solution of PBS, pH 7.4.Contact us for customized product form or formulation.

 

描述：

Recombinant Rat IL-12 Protein is produced by 293F expression system. The target protein is expressed with sequence (Met23-Ser335 aa &Arg 23-Ser215 aa) of Rat IL-12 (Accession Q9R278, Q9R103) fused with a C-His.

 

储存：

Store at -20℃.Store the lyophilized protein at -20℃ to -80 ℃ up to 1 year from the date of receipt.
After reconstitution, the protein solution is stable at -20℃ for 3 months, at 2-8℃ for up to 1 week.

未开盖的干粉蛋白在 -20°C至-80°C可保存12个月；
复溶之后，蛋白溶液在-20°C及以下可保存3个月，在2-8℃可保存1周。

 

复溶：

Centrifuge the vial before opening. Reconstitute to a concentration of 0.1-0.5 mg/mL in sterile distilled water. Avoid vortex or vigorously pipetting the protein. For long term storage, it is recommended to add a carrier protein or stablizer (e.g. 0.1% BSA, 5% HSA, 10% FBS or 5% Trehalose), and aliquot the reconstituted protein solution to minimize free-thaw cycles.

收到重组蛋白产品之后请检查蛋白冻干粉末是否贴于瓶底，如果粉末浮起，开盖之前请先低温离心。将蛋白用说明书中指定的缓冲液复溶至0.1-0.5 mg/mL（请注意蛋白复溶浓度不能低于0.1 mg/mL），室温平衡5-10 min保证充分溶解，复溶过程中请不要剧烈涡旋及吹打蛋白溶液。如需长期储存，建议复溶时添加载体蛋白或者稳定剂（如0.1% BSA, 5% HSA, 10% FBS 或者 5% 海藻糖），同时将复溶后的蛋白溶液按照需求进行分装，储存于-20°C至-80°C，随取随用，避免反复冻融。